網狀纖維由Ⅲ型膠原蛋白構成,網狀纖維染色原理為,網狀纖維表面的糖蛋白與銀化合物結合,經甲醛還原為金屬銀沉淀在纖維內.在應用方面主要用于鑒別上皮性與非上皮性腫瘤、區別某些間葉組織腫瘤和判斷基底膜的完整性等方面.本文采用 Gomori 法對浸染、滴染和倒扣法染色進行比較研究。
1 材料與方法
1. 1 材料 標本采用深圳市第二人民醫院病理科 2014 年至今的標本,其中肉瘤 20 例、骨髓 20 例、肝硬化及肝癌 20例。網染試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司。所用倒扣法染色器皿為試劑瓶蓋切制。
1. 2 方法
1. 2. 1 浸染法 按照 Gomori 法配制銀氨溶液,操作步驟按參考文獻。
1. 2. 2 滴染法 按試劑盒說明書操作步驟進行。
1. 2. 3 倒扣法 采用邁新網染試劑盒,基本步驟同滴染法,在銀氨溶液反應中采用特制容器,將銀氨溶液滴加在容器上,切片倒扣在容器之上進行反應。
2 結果
浸染法染出的切片網狀纖維呈黑色,背景干凈,網狀纖維顯示清晰 ; 滴染法染出的切片背景有較多銀顆粒沉淀,網狀纖維顯示尚可,部分區域無法判讀; 倒扣法染出的切片網狀纖維呈黑色,膠原纖維呈黃棕色,細胞核呈灰黑色,背景干凈,網狀纖維顯示清晰,與浸潤法效果一致.
3 討論
本實驗中的倒扣法是對網染出現的不足或缺點進行改進而摸索出來的一種較好的染色法。浸染法是比較傳統有效染色法,但每次使用的最小試劑也要 50ml,相對于滴染來說浪費試劑并有污染。目前試劑盒的使用不僅節約了配制試劑的時間并且極大地節約了試劑的用量,對成本和環境保護均有利。試劑盒的使用方法為滴染,由于銀氨溶液反應所產生的銀顆粒在重力的作用下可沉積在玻片和組織上,造成切片的背景污染,影響切片的質量。故制作了一種小反應皿,只需在反應皿上滴加銀氨溶液,并將用記號筆在其背面標記組織性狀,將切片倒扣在器皿之上使之反應,而沉淀則沉積到器皿里,并且在反應皿與切片間形成密閉的空間,以隔絕空氣對反應的影響,只在器皿周圍形成沉積( 只需在實驗結束后擦拭掉即可) ,不影響染色結果。其染出效果媲美浸染法,又具備滴染法的優點。
倒扣法很好地解決了染色沉淀及揮發等問題,不僅在網狀纖維染色中取得良好的效果,在揮發性染液及需長時間反應的特殊染色中均能發揮其優點,如蘇丹Ⅲ染色、Mallory 磷鎢酸蘇木精染色法、彈性纖維染色等等。
參考文獻:
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