中醫藥的抗腫瘤作用受到國際廣泛關注，得到極大認可，成為腫瘤研究的新熱點和方向。黑蒜有廣泛的抗菌、殺菌、抗病毒作用，可以增強人體免疫力，用來防止免疫反應的風險。因為它能刺激淋巴細胞、巨噬細胞，抑制腫瘤細胞的擴散，對預防腫瘤及對抗腫瘤生長有著積極的作用。本研究以荷 H22 小鼠為實驗對象，研究黑蒜提取液對荷 H22 小鼠移植瘤抗血管生成作用，為臨床應用提供理論依據。
1、 材料與方法
1.1 細胞系、試劑及儀器：黑蒜提取液：中國人民解放軍第 107 醫院實驗中心采用大連華谷蒜業有限公司生產的黑蒜制備成相當于生藥 1g/mL 黑蒜提取液；DMEM 高糖培養基：Hyclone 公司；已滅活胎牛血清：Hyclone 公司；胰蛋白酶（trypsin）：Amersco 公司；DMSO：安徽安特化工有限公司；MVD：Boosen 生物科技有限公司；VEGF：武漢博士德生物工程有限公司。
1.2 實驗動物和細胞系：C57BL/6 小鼠 40 只，6～8 周齡，雄性，18～21g，購于北京協和醫科大學實驗動物中心，SPF 級飼養環境飼養。小鼠肝癌 H22 細胞系濱州醫學院實驗中心惠贈，小鼠腹腔傳代。
1.3 動物造模：小鼠 H22 細胞腹腔傳代 4 次后，抽取小鼠腹水，PBS洗滌 3 次，以 1000r/min 離心 4min。0.4%苔盼藍拒染法檢測細胞存活率，存活率高于 90%條件下以 PBS 調整細胞濃度為 1×105個/ml，以 0.2ml/只接種于小鼠背部。
2、 實驗方法
2.1 實驗分組及處理：待小鼠皮下接種腫瘤直徑達 8～10mm 后隨機分為 4 組。陰性對照組：腹腔注射 0.9% NaCl 0.2ml/次，連續 14d。黑蒜提取液低劑量組（20mg/ml）、黑蒜提取液中劑量組（50mg/ml）、黑蒜提取液高劑量組（100mg/ml）腹腔注射黑蒜提取液 0.2ml/只，連續14d。
2.2 免疫組織化學法檢測 MVD、VEGF 蛋白表達：取等量小鼠瘤體然后放入 4%的多聚甲醛固定液中固定后，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋、作 4μm 切片，選用 bcl-2、bax 單克隆抗體，應用SABC 法對小鼠瘤體組織進行免疫組織化學染色，MVD、VEGF 抗體濃度分別為 1∶150、1∶250，AEC 顯色，蘇木素輕度復染，封片。將所染免疫組化切片置于 OLYMPUS BX51（FN 22）高倍鏡（×40）下觀察，每張片取 5 個視野，實驗重復 3 次。
2.3 統計學方法：用 SPSS 13.0 for windows 統計學軟件處理。檢測數據以均數±標準差（x±s）表示，計數資料采用 X2檢驗，計量資料采用t 檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。
3、 結 果
MVD、VEGF 蛋白表達：陰性對照組、黑蒜提取液低劑量組、黑蒜提取液中劑量組、黑蒜提取液高劑量組 MVD 分別為（9.7±0.6）、（8.6±0.7）、（6.9±0.9）、（4.4±0.7），VEGF 分別為（67.3±12.3）、（59.4±11.8）、（40.5±10.2）、（31.2±9.3）。
4、 討 論
肝細胞癌是最常見的臨床惡性腫瘤之一，每年全世界有超過六十萬個新的 HCC 患者，為排名第五的惡性腫瘤。肝細胞癌發病隱匿，發展迅速，高度惡性，容易轉移。中醫治療可以減輕癥狀，減少患者的痛苦，提高生活質量。中醫和中藥提取物能促進腫瘤細胞凋亡、提高免疫力，改變腫瘤生長的微環境，達到抑制腫瘤生長的目的。
肝癌是一種血管生成依賴性腫瘤，其增長、入侵和轉移需要血管生成。顯微腫瘤微血管密度可以直接反映腫瘤血管生成的程度，許多惡性腫瘤組織中 MVD 明顯更高，這是一個獨立的預后因子評估后淋巴結轉移。血管內皮生長因子（VEGF）對血管內皮細胞的影響是最強的，最特殊的生長因子。VEGF 在腫瘤血管生成中起著重要的作用。這項研究的結果發現，EABG 可以顯著抑制移植瘤的生長，減少腫瘤組織 MVD 和 VEGF 的表達。結果表明:EABG 能明顯抑制 H22 移植瘤 MVD 和 VEGF 的表達發揮抗血管生成的作用。
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