內經曰：“陽氣者，若天與日，失其所，則折壽而不彰”。近年來，隨著對陽氣的日益重視，臨床上運用溫陽藥物治療惡性腫瘤的報道日益增多，其療效逐步為大家所認可。于是，出現了用溫陽藥物治療惡性腫瘤的實驗研究，但多數研究局限在單藥或是單藥的提取物方面，對于復方治療的研究頗少。蘇州市中醫醫院腫瘤科主任李湧健教授在長期的臨床實踐中得出“癌為陰毒，溫而化之”的科學假說，并指導他的研究生進行了中醫溫陽名方四逆湯誘導胃癌細胞凋亡的系列研究，佐證了他的科學假說。在本實驗研究中，我們通過 MTT 法觀察比較了不同甘草比例的四逆湯生藥提取物在抑制胃癌細胞 SGC-7901 中的作用，現報道如下。
1、 材 料
1.1 細胞株：胃癌細胞 SGC-7901，由蘇州大學生命科學院提供。
1.2 實驗用藥
1.2.1 5-Fu （濃度 50ug/ml）（生產廠家：上海旭東海普，批號：090916）。
1.2.2 中藥：制附片（批號：100412）、干姜（批號：100415）、炙甘草（批號：100305）由蘇州市春暉堂中藥飲片廠提供。
1.3 試劑及配制
1.3.1 培養基：DMEM（美國 GIBCO 公司）由三蒸水配制，用 HEPES（華義生物工程公司）調節溶液 PH 值至 7.2，過濾除菌，無菌條件下分裝，置于 4℃冰箱保存備用，使用時配制成含 10%胎牛血清的完全培養液 [由 90%體積 DMEM，10%體積胎牛血清（杭州四季青公司）及雙抗（青霉素 100u/ml+鏈霉素 100u/ml）配制而成]。
1.3.2 PBS：NaCl 8.001g、KCl 0.200g、Na2HPO4*H2O 1.560g、KH2PO40.200g 溶于 1L 三蒸水，經過濾除菌后分裝置于 4℃冰箱保存備用。
1.3.3 0.25%胰蛋白酶：稱取 0.125g 胰蛋白酶（購自上海閃晶分子生物科技有限公司），0.010gEDTA，將兩者溶于 50ml PBS 溶液中，經過濾除菌后置于 4℃冰箱保存備用。
1.3.4 MTT：稱取 12mg MTT 粉末，溶于 24ml 含有 10%胎牛血清的完全培養液中，充分吹打，使 MTT 粉末充分溶解，用 0.22um 微孔濾器過濾除菌備用。
1.3.5 二甲基亞砜（DMSO）（購自無錫市展望化工試劑有限公司）。
2、 方 法
2.1 細胞培養和傳代：采用貼壁細胞培養的方法，培養液為含有10%胎牛血清的完全培養液（其中，含有雙抗：100u/ml 青霉素,100u/ml 鏈霉素）。細胞培養環境為 5%CO2，37℃，飽和濕度，2～3d 傳代一次。所有實驗作用細胞均為對數生長期細胞。
2.2 實驗分組：實驗分為空白對照組、陽性對照組及五個實驗組。陽性對照組選用 5-FU，各實驗組方用藥如表 1 所示（注：表中數字為藥量比，四逆湯三藥傳統配伍比例為 1.5∶1∶1）。
2.3 觀察指標及方法：MTT：將處于對數生長期的細胞用胰酶常規消化，收集細胞后用含有 10%胎牛血清的完全培養液稀釋，調整濃度為 1×105/ml，接種于 96 孔培養板，每孔 100ul?？瞻讓φ战M中加入含有 10%胎牛血清的完全培養液 100ul/孔，陽性對照組中加入濃度為 50ug/ml 的 5-Fu 100ul/孔，各實驗組中分別加入藥液 100ul/孔。
每組均設 8 個復孔。將 96 孔板放置于 37℃，5%CO2培養箱中培養。
24h 后取出，將各孔中的上清液吸出后加入 MTT（0.5mg/ml）溶液100ul，放入培養箱中繼續培養 4h 后，用 DMSO 溶液 150ul 終止反應，置于酶標儀 490nm 處測定 OD 值。
抑制率（%）=（1-實驗組平均 OD 值/空白對照組平均 OD 值）×100%
2.4 統計方法：數據以（x±s）表示，采用 Excel 軟件中的統計公式計算 x、SD、CV，各藥物濃度組與空白對照組的比較、各中藥組組間比較均采用 t 檢驗，以 α=0．05 為檢驗水準。
3、 結 果
實驗結果顯示，經甘草不同配伍比例的四逆湯作用 24h 后，胃癌細胞 SGC-7901 生長受到不同程度的抑制，其中，以實驗 E 方對胃癌細胞 SGC-7901 的抑制作用最強，實驗 A 方對胃癌細胞 SGC-7901 的抑制作用較弱，結果見表 2。
4、 討 論
以上實驗中，我們研究了溫陽名方四逆湯提取物對胃癌細胞SGC-7901 的體外抑制作用，結果表明，四逆湯提取物對后者具有明顯的抑制作用，這個結果進一步佐證了李湧健教授“癌為陰毒，溫而化之”的科學假說，為今后進一步研究溫陽法治療腫瘤提供了依據。
廣西中醫藥大學劉力紅教授在他的著作《思考中醫》中提到：“土雖非火，可是卻能使火的作用真正落實到實處，使火熟物而不焦物，使火溫物而不炎物……四逆湯要想真正地發揮溫養的作用、回陽救逆的作用，炙甘草便是關鍵的關鍵?！币陨细骷揖J識到了炙甘草在四逆湯中的重要作用。本實驗結果亦證明了上述重要作用，提示隨著炙甘草在四逆湯中配伍比例的增加，整方對胃癌細胞的抑制作用隨之增強，進一步證明了炙甘草對四逆湯整方抗癌作用的影響，啟發我們在運用溫陽法治療惡性腫瘤時，應重視甘與溫、土與火的配伍關系，為進一步的實驗及臨床研究提供了實驗依據。
參考文獻：
[1]田代華.黃帝內經素問[M].北京.人民衛生出版社，2005：5.
[2]張曉迪，李湧健.溫陽法治療惡性腫瘤的研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報，2009，11（6）：55-57.
[3]張仲景.傷寒論[M].北京：人民衛生出版社，1978：150.
[4]成無己.傷寒明理論[M].北京：中國中醫藥出版社，2007.
[5]吳謙.醫宗金鑒[M].北京：人民衛生出版社，1998.
[6]劉力紅.思考中醫[M].桂林：廣西師范大學出版社，2007.
