比伐盧定\\(Bivalirudin\\)是美國Medicine公司研發的直接凝血酶抑制劑,為人工合成藥物,其抗凝成分為水蛭素衍生物C端的多肽,由20個氨基酸組成,相對分子質量2 180道爾頓[1-2].比伐盧定通過直接抑制凝血酶而發揮作用.
比伐盧定在臨床主要適應癥為經皮冠狀動脈介入治療\\(PCI\\)圍手術期用藥,用藥目的是保證手術期間患者處于低凝血狀態,以防止術中或術后,由于手術刺激而發生血栓.前期研究表明[3-4],比伐盧定靜脈給藥后即刻起效,而半衰期較短,約25~30min,因此建議臨床合適的給藥方式為序貫給藥,即先快速靜脈推注,然后持續靜脈點滴至手術結束,本研究設計靜脈推注后持續靜滴的序貫給藥方案,在健康受試者中進行研究,以闡明比伐盧定在中國健康受試者中的藥代、藥效學特征及安全性.
1材料與方法
1.1儀器與試劑
1.1.1儀器
Agilent 6410B型三重四極桿串聯質譜 儀,配有離子噴霧離子源以及AgilentMassHunter Workstation B.01.04\\(B84\\)數據處理系統,美國Agilent公司;Agilent 1200高效液相色譜儀,美國Agilent公司;色譜柱為ZorbaxEclipse plus C18柱\\(2.1mm×100mm,3.5μm\\),美國Agilent公司.全自動血凝分析儀STA-R\\(法國STAGO\\)、Hemochron Response全血凝時間測定儀\\(美國ITC\\).
1.1.2 試劑
比伐盧定標準品,由武漢遠大制藥集團有限公司提供,純度為98.2%;地西泮,購自Sigma公司,純度為98.6%;甲醇、乙腈為色譜純,購自fisher有限公司,其余試劑均為分析純;人空白血漿由解放軍總醫院提供.
1.1.3 藥品注射用比伐盧定0.25g/支;批號:100601;生產日期:2010年6月,有效期:2年.由武漢遠大制藥集團有限公司生產.
1.2受試者
按健康受試者要求選取志愿者
試驗前所有受試者的脈搏、血壓、呼吸等生命體征檢查,以及心電圖及血、尿常規和肝、腎功能等實驗室檢查,均在正常范圍.詢問病史,排除慢性疾病患者,尤其是有出血性疾病病史患者.試驗期間,禁煙酒以及刺激性食物.受試者簽署經倫理委員會批準的知情同意書后,參加本研究.本次研究中共有12例健康受試者參加并完成試驗,男女各半.
1.3給藥方法及血樣采集[5]
12名受試者以0.75mg/kg靜 脈 推 注 后, 立 即 接 續 以1.75mg·kg-1·h-1的速度勻速靜滴4h.分別于推注前與推注結束即刻、靜滴開始后10,30,60,120,240拔 針 點,245,250,260,285,300,320,360,480min共15個時間點于對側上臂靜脈各取血10mL.
3mL用于血藥濃度測定,取得靜脈血后馬上在冷凍離心機中以9 600r/min的速度,4℃,離心約5min后分離血清,置于-80℃冰箱保存待測.其余3mL血用于凝血四項檢驗,4mL血用于ACT檢驗.
1.4血藥濃度及ACT測定方法采用液-質聯用進行血藥濃度測定[6-7],內標為地高辛.ACT用全血凝時間測定儀\\(美國ITC\\)測定,測定3管取平均值.
1.5數據處理.血 藥 濃 度-時 間 原 始 數 據 用Phoenix WinNolin 5.2.1處理,采用非房室模型求算藥代動力學參數,并計算藥效學參數.血藥濃度-時間曲線下面積\\(AUC\\)以梯形面積法計算.Cmax\\(或C0\\)、tmax采用實測值.藥效模型采用有基礎效的M-M equation模型.
2結果
2.1比伐盧定序貫給藥藥代動力學
比伐盧定序貫給藥10min至靜滴結束,血藥濃度相對穩定,波動在3 100~4 500μg/L之間,靜滴結束后血藥濃度迅速降低,見圖1.采用非房室模型,12名受試者靜脈推注后靜滴藥代參數如下:
Cmax為\\(6 066±1 909\\)μg/L;達峰時間tmax為\\(1.56±1.89\\)h.消除半衰期t1/2為\\(0.48±0.15\\)h;血藥濃 度-時 間 曲 線 下 面 積AUClast為 \\(18 026±6 253\\)h·μg·L-1;表觀分布容積V/F分別為\\(0.23±0.19\\)L/kg;清 除 率CL/\\(F\\)分 別 為\\(0.16±0.07\\)L/h;消 除 速 率 常 數Ke分 別 為\\(1.52±0.28\\)h-1.t檢驗統計分析結果表明,男女間藥代動力學參數差異無統計學意義,提示比伐盧定代謝過程無性別差異.結果見表1.
2.2比伐盧定序貫給藥藥效動力學
比伐盧定序貫給藥開始至靜滴結束,ACT值相對穩定,波動在220~240s之間,靜滴結束4h后恢復至給藥前.由圖1可見,ACT變化趨勢與比伐盧定血藥濃度變化相吻合,基本上無滯后效應,提示比伐盧定起效迅,且停藥后,迅速恢復.圖2可見比伐盧定濃度與效應關系符合有基礎效的M-M equa-tion模型[8],采用Phoenix WinNolin 5.2.1計算藥效學參數,E0=126.87,Emax=340.03,EC50=4 258.03,比伐盧定藥效學模型:
2.3比伐盧定序貫給藥安全性
比伐盧定對凝血功能影像明顯,但持續時間很短,停藥后24h回復至基線水平.12名受試者在給藥前后生命體征、血常規、血糖、血脂、肝腎功能等均未出現臨床意義變化.試驗期間有5例次患者出現不良事件,其中2例牙齦出血,1例鼻衄,均為輕度一過性反應,未作處理后自行恢復,可能與藥物有關.
另有1例下腹部不適,1例頭暈.
3討論
PCI過程中使用球囊擴張血管病變,常使血管病變部位的內膜撕裂,斑塊內容物尤其組織因子暴露于血液,激活凝血系統形成血栓;另外置入的支架是一種異物,支架金屬表面的生物-血液相容性降低,易誘發支架內血栓形成.因此接受PCI的病人屬于血栓高危人群,在圍手術期對這部分病人給予適當的抗栓治療十分重要.
PCI手術要求抗凝藥物快速起效,并在整個操作過程中維持效果.比伐盧定是快速起效的抗凝劑,但半衰期短,僅20~30min,為在一段時間內保持藥物的療效,應采用靜脈持續點滴的給藥方式,因此臨床多采用序貫給藥方式,即先給予負荷劑量靜脈推注或快速點滴,再靜脈點滴維持劑量,以便快速起效,或盡早達到穩態.前期研究中[9],通過單次靜脈推注比伐盧定0.75~1.05mg/kg,健康受試者可以耐受,并建立了比伐盧定PK/PD模型,根據此模型我們設計了靜脈 推 注 比 伐 盧 定0.75mg/kg, 再 以1.75mg·kg-1·h-1靜脈持續點滴的序貫給藥方案.結果表明,靜注10min至停藥后,其血藥濃度 波 動 在3 000~4 500μg/L之 間,對 應 的ACT值波動在220~240s之間,能夠滿足臨床抗栓需求.比伐盧定序貫給藥試驗期間未出現嚴重不良事件,凝血功能于停藥后24h恢復至正常水平,受試者安全耐受.
靜脈給予比伐盧定后,抗凝血功能起效迅速,并以濃度依賴方式延激活ACT,但持續時間很短,給藥后4h回復至基線水平,這可能與比伐盧定作用機制及代謝有關.比伐盧定作用與肝素不同[10-11],它不依賴于抗凝血酶IV、肝素輔因子Ⅱ等,其為凝血酶直接的、特異的、可逆性抑制劑.
凝血酶是凝血反應中起核心作用的絲氨酸蛋白酶:它水解纖維蛋白原生成纖維蛋白單體;激活凝血因子XⅢ;促進纖維蛋白交聯形成穩定血栓的共價結構.同時,凝血酶激活凝血因子V,Ⅷ;激活血小板,促進血小板聚集和顆粒釋放.比伐盧定入血后,不與血漿白蛋白相結合,特異性與凝血酶結合,無論凝血酶處于血循環中還是與血栓結合,均可與其催化位點和陰離子結合位點\\(底物識別位點\\)發生特異性結合,從而直接抑制凝血酶的活性,因此比伐盧定抗凝血作用強大,起效很快.
但 同時因凝 血酶可水解比伐盧定多肽順序中Arg3和Pro4之間的肽鍵,使之失活,所以比伐盧定對凝血酶的抑制作用是可逆而短暫的.
參 考 文 獻
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