濟川養生駐顏不老方\\( JYZBF\\) 出自黃濟川先生的臨床效驗方,由冬蟲夏草、鹿茸、紅參、仙茅、老龜板、山茱萸等數十味藥材組成,具有填精補髓、益陰扶陽、強筋壯骨、除皺消斑、增強免疫、增強活力之功效,該方為補腎良方.現代中藥驗方特別是補腎方已應用于老年腎虛型頸椎病、氣虛血淤腎虛型頸椎病的治療[1 -2].JYZBF 可用于中醫辨證為腎虛型人群的養生保健或疾病預防,還可用于腎虛型導致的各類疾病的治療,成都肛腸?？漆t院將其廣泛應用于治療腎虛型頸椎病患者,療效顯著.現選擇大鼠腎虛型頸椎病模型[3],進行該方的藥效學實驗研究.

1 實驗部分

1. 1 儀器、試藥與動物

CKX31 型光學顯微鏡 \\( 日本奧林巴斯\\) ; SN -697 型全自動雙探頭放射免疫 γ 計數器\\( 上海原子核研究所日環儀器一廠\\) .雌二醇\\( E2\\) 放射免疫分析藥盒\\( 北京北方生物技術研究所\\) ; 乙二胺四乙酸\\( EDTA\\) \\( 成都市科龍化工試劑廠\\) ; 濟川養生駐顏不老方藥酒\\( 成都肛腸?？漆t院醫院\\) ; 其余試劑為分析純.♀SPF 級 Wistar 大鼠[四川省醫學科學院實驗動物研究所,合格證號: SCXK\\( 川\\) 2008 - 24]30 只,體重 200 ± 10 g.

1. 2 方法與結果

1. 2. 1 藥物的制備 準確量取濟川養生駐顏不老方藥酒,用生理鹽水稀釋 3 倍,制成酒精度為 12 的供試藥液\\( 10 mL 相當于原生藥材 0. 33 g\\) .

1. 2. 2 大鼠腎虛型頸椎病模型的建立 采用動靜力失衡大鼠椎間盤退變模型復合去卵巢腎虛模型構建腎虛型頸椎病模型[4].選擇 20 只大鼠,ip 戊巴比妥鈉\\( 30 mg·kg- 1\\) 麻醉,無菌下操作,經腰腹側正中進入,分開腰部筋膜,分離暴露卵巢,結扎輸卵管和周圍血管后,摘除卵巢,同法摘除另一側卵巢;將大鼠頸后部剪毛和清潔后,在頸背部正中縱向切口,長約 2. 0 ~2. 5 cm,切開皮膚后,橫向切斷頸夾肌和頭、頸、寰最長肌,切除頸髂肋肌與頭半棘肌,再依次切除棘上和棘間韌帶; 術后縫合好切口,正常飼養 2 月后,即造成大鼠腎虛型頸椎病模型.

1. 2. 3 大鼠分組與給藥 將 20 只模型大鼠隨機均分為給藥組和模型組,另取正常大鼠 10 只作為正常組.給藥組大鼠分別于 8: 00、18: 00 ig 給予藥液2 mL,模型組、正常組大鼠 ig 生理鹽水 2 mL,連續15 d.

1. 2. 4 子宮及附件的形態和質量分析 大鼠用戊巴比妥麻醉后,取出子宮及附件,肉眼觀察子宮及附件的形態、體積和大小.模型組較正常組的子宮體積變小,輸卵管管徑明顯變細,表明造模成功,但與給藥組比較,子宮及附件形態無明顯變化.稱取子宮及附件質量,正常組大鼠去除雙側卵巢后再稱取子宮和附件的質量,每組隨機取 8 個樣本.表 1 顯示: 模型組與正常組大鼠差異顯著,但與給藥組比較無顯著性差異,表明從子宮及附件質量分析,JYZBF藥酒的藥效并不顯著.

1. 2. 5 血清中 E2的含量測定 大鼠用戊巴比妥麻醉后,腹主動脈采血 2 mL,搖勻放入水浴中 20 min,于 2 × 103r·min- 1離心 10 min,分離出血清置- 20 ℃ 保存,每組隨機取 8 個樣本用放射免疫法測定血清中 E2的含量.表 1 顯示: 模型組大鼠較正常組的血清中 E2含量明顯降低\\( P <0. 05\\) ,表明造模成功; 與模型組、正常組相比,給藥組大鼠的血清中E2含量有顯著性差異\\( P <0. 05\\) ,表明 JYZBF 藥酒對大鼠腎虛型勁椎病大鼠具有治療作用,表現為調節大鼠血清 E2含量達到或接近正常水平.

1. 2. 6 頸椎間盤的組織病理學觀察 取大鼠的頸椎間盤,用配方甲醛固定 24 h.清水沖洗后,用20% EDTA 脫鈣 4 周,脫水、透化、包埋,橫斷面切片,HE 染色.在光鏡下觀察椎間盤組織的病理學數據.頸椎間盤 HE 染色后,正常組大鼠的頸椎間盤結構清晰顯示纖維環規則排列,中央大髓核清晰可見,鈣化的軟骨下分布有均勻的血管,透明軟骨鈣化清晰可見,細胞組織分布均勻; 模型組大鼠的已出現退行性改變,與正常組相比,椎間盤纖維環出現裂隙或者排列紊亂,髓核嚴重破壞或皺縮并不可見,鈣化的軟骨下分布血管不可見,細胞數量減少; 給藥組大鼠的出現退行性改變,但較模型組輕微,中央大髓破壞或皺縮,鈣化的軟骨下血管可見.從頸椎間盤組織病理學的形態學分析,JYZBF 藥酒的藥效并不顯著,但具有一定的改變組織供血的效果.

1. 2. 7 數據處理 采用 SPSS 10. 0 軟件進行統計分析,數據用珋x ± s 表示,多組間比較采用 Anova 方差分析.

2 討論

腎虛與頸椎病間存在密切的關系[5].臨床上,性激素的水平在一定程度上可反應腎氣的衰退,通常作為腎虛證的現代指標[6].文中選擇腎虛型頸椎病模型大鼠為模型動物,從形態學和功能學兩個方面進行效驗方的初步功效學研究,濟川養生駐顏不老方可顯著改善腎虛型頸椎病模型大鼠的功能學指標,但對形態學指標改善不顯著,對腎虛型頸椎病出現的子宮及附件形態萎縮、質量減輕、頸椎間盤結構破壞等指標的改善效果不顯著,但對一些功能學指標如腎虛型頸椎病出現的雌二醇降低、頸椎間盤結構破壞導致的血管分布不均有顯著改善作用.

參考文獻:

[1] 江建春,李晨光,周泉,等. 益氣化瘀補腎方對大鼠腎虛型頸椎病的作用機制[J]. 中西醫結合學報,2008,6\\( 12\\) :1280 -1285.

[2] 王擁軍,施杞,江建春,等. 益氣化瘀補腎方治療氣虛血瘀腎虛型頸椎病大鼠的機制研究[J]. 中西醫結合學報,2009,7\\( 1\\) : 53 -58.

[3] 施杞,郝永強,彭寶淦,等. 動靜力平衡失調與頸椎病 - 頸椎病動物模型的實驗研究[J]. 上海中醫藥大學學報,1999,13\\( 1\\) : 52 -56.

[4] 江建春,李晨光,梁倩倩,等. 大鼠腎虛型頸椎病模型的建立[J]. 中西醫結合學報,2008,6\\( 10\\) : 1034 -1039.

[5] 張宜,施杰,李福安,等. 溫針治療腎虛型頸椎病的遠紅外熱斷層掃描研究[J]. 中醫臨床研究,2011,3\\( 5\\) : 8 -9.

[6] 楊俊姝,郝建新. 性激素與腎虛證"實質"的相關性研究進展[J]. 湖北中醫學院學報,2008,10\\( 3\\) : 60 -62.