非人靈長類動物在親緣關系上和人最接近,與人類的遺傳物質有 75% ~98. 5% 的同源性[1],在組織結構、免疫、生理和代謝等方面與人類高度近似,是極其珍貴的實驗動物,其應用價值遠超過其他種屬的實驗動物[2].近年來,國外對非人靈長類實驗動物的需求量逐年增加,國內非人靈長類實驗動物養殖企業每年出口實驗猴約 2 萬只,約占美國市場份額的 62%以上,歐洲市場份額的 100%.此外,每年面向國內銷售約 1 萬只。與此同時,我國的實驗猴養殖事業有了長足的發展,據中國實驗靈長類養殖開發協會( CLPA) 2012 年底統計顯示全國實驗獼猴和食蟹猴的總存欄量已超過 29 萬只,其中食蟹猴高達25 萬多只[3].伴隨著時間的推移,必將有大量的食蟹猴邁入中老年階段( 年齡≥10 歲為中年猴;年齡 >15 歲為老年猴)[4],這就為人類慢性疾病研究所亟需的自發性靈長類動物疾病模型的篩選提供了豐富的資源基礎。
因而,建立中老年食蟹猴常規的臨床血液生理和生化指標不僅對其應用提供重要的參考意義,也為標準化的生產管理和日常疾病的診斷發揮著日益重要的作用。本研究對 119 只 11 ~ 16 歲的食蟹猴的一般生理指標( 體重、體長和腰圍) 、血液學和血液生化學指標進行了全面系統的測定,并進行了性別間的比較,為食蟹猴在生物醫學領域的應用提供參考信息。
1 材料和方法
1. 1 實驗動物
食蟹猴119 只,雄性80 只,雌性39 只。級別: 普通級; 年齡: 11 ~ 16 歲; 動物生產單位: 海南金港生物技術股份有限公司【SCXK( 瓊) 2010-0001】。實驗于海南金港生物技術股份有限公司的普通級非人靈長類動物實驗室進行【SYXK( 瓊) 2014-0017】。
飼養條件: 單籠飼料,飼喂膨化飼料,動物自由飲水。
1. 2 測定方法
1. 2. 1 一般生理指標 ( 體重 / body weight、體長 /crown-rump length 和腰圍 / waist circumference) 測定:動物空腹時間 >16 h,上午 8: 00 ~11: 00 稱重,稱重前肌注舒泰 50( 0. 1 mL/kg BW) 進行麻醉,采用嬰兒秤進行稱量; 體長和腰圍測定均采用皮尺,測定時把已麻醉好的動物側躺,自然伸直,體長測量是自頭頂部順著背部中線自然延伸至尾根部,腰圍測量是皮尺自肚臍處環繞一周,松緊適中即可。
1. 2. 2 血液生理指標測定: 如 1. 2. 1 所述進行動物的空腹、麻醉和采集靜脈血 2 mL.應用邁瑞 BC-5500 全自動血細胞分析儀及配套試劑進行血細胞計數檢測,檢測項目為: 白細胞數( WBC) 、中性粒細胞數目( NEUT#) 、淋巴細胞數目( LYMPH#) 、單核細胞數目( MONO#) 、嗜酸性粒細胞數目( EO#) 、嗜堿性粒細胞數目 ( BASO #) 、中性粒細胞百分比( NEUT%) 、淋巴細胞百分比( LYMPH%) 、單核細胞百 分 比 ( MONO%) 、嗜 酸 性 粒 細 胞 百 分 比( EO%) 、嗜堿性粒細胞百分比( BASO%) 、紅細胞數( RBC) 、血紅蛋白( HGB) 、紅細胞壓積( HCT) 、RBC 平均體積 ( MCV) 、RBC 平均血紅蛋白含量( MCH) 、RBC 平均血紅蛋白濃度( MCHC) 、紅細胞分布寬度變異系數( RDW-CV) 、紅細胞分布寬度標準差( RDW-SD) 、血小板總數( PLT) 、平均血小板體積( MPV) 、血小板分布寬度( PDW) 、血小板壓積( PCT) .
1. 2. 3 血液生化指標測定: 如 1. 2. 1 所述進行動物的空腹、麻醉和采集靜脈血 3 mL,離心取血清,應用東芝 120 全自動生化儀及上??迫A檢測試劑盒進行血液生化學檢測,檢測項目為: 谷丙轉氨酶( ALT) 、天門冬氨酸氨基轉移酶( AST) 、總膽紅素( TBIL) 、總蛋白( TP) 、白蛋白( ALB) 、球蛋白( GLO) 、白球比( A/G) 、堿性磷酸酶( ALP) 、谷氨酰轉肽酶( GGT) 、葡萄糖( GLU) 、尿素( UREA) 、肌酐( CREA) 、總膽固醇( TCH) 、甘油三酯( TG) 、肌酸激酶( CK) 、乳酸脫氫酶( LDH) .
1. 3 結果處理
應用 SPSS 統計軟件對實驗數據進行分析,結果以 Mean ± SD 表示,采用 t 檢驗統計方法,比較各測定指標雌雄間差異,顯著性差異水平 α =0. 05.
2 結果
2. 1 一般生理指標
雌、雄性動物的體重、體長和腰圍指標差異極顯著( P < 0. 01) ,雄性高于雌性( 表 1) .【1】
2. 2 血液學指標
雄性動物的 NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO#、NEUT% 、LYMPH% 、EO% 、BASO% 、MCV、MCH、RDW-CV、PCT 與雌性動物相比差異極顯著 ( P <0. 01) ,MONO% 、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV與雌性動物相比差異極顯著( P < 0. 05) ,僅有WBC、MONO#、RBC、PLT、PDW 與雌性動物相比差異不顯著( P > 0. 05) ( 表 2) 【2】
2. 3 血液生化學指標
雄 性 動 物 的 TBIL、ALB、GLO、A/G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK 與雌性動物相比差異極顯著( P < 0. 01) ,ALT、GGT 與雌性動物相比差異極顯著( P < 0. 05) ,僅有 AST、TP、LDH 與雌性動物相比差異不顯著 ( P > 0. 05 )( 表 3) .
3 討論
藥物的藥效學研究、臨床前安全性評價研究是新藥研發的核心內容。積累動物的背景資料諸如體重及常規血液生理生化指標等就顯得尤為重要,5歲以下的研究結果已發表[5],但有關中老年食蟹猴( >10 歲以上) 的相關背景資料卻鮮見報道。本研究測得的中老年食蟹猴( 11 ~16 歲) 一般生理指標( 體重、腰圍、體長) 表現出極顯著的性別差異。結合李冰[6]的研究結果,我們可以得出,隨著年齡的增長食蟹猴雌雄間體重的差異性會越來越顯著。這就要求我們在做實驗方案制定時注意不同年齡段雌雄間一般生理指標的差異。
本研究測得的中老年食蟹猴血液學以及血液生化學指標結果表明雌雄間在 NEUT#、LYMPH#、EO#、BASO #、NEUT% 、LYMPH% 、EO% 、BASO% 、MCV、MCH、RDW-CV、PCT、MONO% 、HGB、HCT、MCHC、RDW-SD、MPV 和 TBIL、ALB、GLO、A / G、ALP、GLU、UREA、CREA、TCH、TG、CK、ALT、GGT 等指標方面存在顯著性差異。李巖[7]等研究顯示 4 ~7 歲食蟹猴在 WBC、ALP、CHO、CRE 和 GLU 指標上有性別差異,唐賢麗[8]等研究顯示3 ~5 歲食蟹猴僅有 GLU 存在性別差異,石巧娟[5]等研究結果顯示UREA、CK 值與性別有密切關系,結合本研究可以得出伴隨著年齡的增長這種性別差異依然存在,并且存在著如上所述更多血液生理生化指標的性別差異。說明隨著食蟹猴年齡的增長,雌雄個體間血液生理生化指標的差異更多且顯著。
通過與已有報道相比較,發現在 RBC、PLT、GLU和 TP 等重要血液生理生化指標上沒有年齡相關性,各年齡結果基本一致,而 WBC、HGB 和 TC 等指標則出現中老年動物比青壯年的偏低,而中老年雌性動物 TG 高于其他年齡段的動物。
進一步與中老年人相關血液生理生化的關鍵指標比較可知,人類的 GLU、TCH 和 TG 比中老年食蟹猴的偏高,WBC、RBC 和 PLT 則偏低,而 HGB 則基本一致[9 -11].
已有研究表明,伴隨著年齡的增長,猴自發性動物疾病模型的發生率就會增加[12],并且自發性動物模型在研究人類疾病時具有重要價值[13],尤其是自然衰老靈長類動物模型在特征和發生機制方面能較全面的反映人類衰老基本情況[14],這就為中老年食蟹猴動物疾病模型的篩選和開發利用提供了較為基礎的研究背景資料。
參考文獻:
[1] 季維智,鄒如金,商恩緣,等。 非人靈長類在生物醫學研究中的應用及其保護[J]. 動物學研究,1996,17( 4) : 509 -519.
[2] 田朝陽,楊守凱。 非人靈長類動物在醫學科學實驗中的應用[J]. 中國比較醫學雜志,2009,19( 6) : 74 -77.
[3] 馬廣鵬。 我國非人靈長類實驗動物產業發展的現狀、問題及對策[J]. 中國農村科技,2013,8: 74 -75.
[4] 花秀春,時彥勝,孫兆增,等。 人工飼養恒河猴、食蟹猴的繁殖性能初報[J]. 中國實驗動物學報,2009,17( 3) : 219 -221.
[5] 石巧娟,初明明,田朝陽,等。 人工飼養食蟹猴血液常規和生化指標測定[J]. 實驗動物與比較醫學,2012,32( 4) : 344- 347.
[6] 李冰。 食蟹猴生長曲線[J]. 實驗動物科學與管理,2006,23( 3) : 61 -62.
[7] 李巖,何君,孫井江,等。 實驗用食蟹猴生物學指標的研究[J]. 現代預防醫學,2010,37( 13) : 2503 -2505.
[8] 唐賢麗,徐龍建,久田,等。 實驗用食蟹猴的生物學指標[J].