在常規病理切片的制作過程中,組織蠟塊切下的蠟片容易出現干燥、碎裂,嚴重影響切片質量和制片速度[1].目前尚無統一方法,有采用“濕紙團擦拭蠟面”的方法來濕化蠟片; 也有采用“哈氣”的方法,用呼出的水汽來濕化蠟面[2].但是,以上方法影響切片效率、易導致標本污染。所以,臨床迫切需要一種既能保證工作效率同時又能提高切片質量的加濕方法。我們通過聯合使用超聲波加濕器及自制的切片機加濕套裝對蠟片進行加濕,期望通過該方法改善制片質量,同時保證工作效率。
1 材料與方法
1. 1 材料 搜集 2014-01-2014-05 間北京協和醫院病理科外檢標本共 100 例,其中肝組織 16 例,腦組織 13 例,甲狀腺組織 45 例,淋巴結組織 26 例。所用器材: 櫻花脫水機,LeicaRM2235 型切片機,中國亞都牌 SC-EB35B 型超聲波加濕器,羽毛 A35 型刀片,塑料軟管一段,塑料載玻片盒蓋 1 個。
1. 2 方法
1. 2. 1 標本處理 100 例標本均經過 4% 中性甲醛固定,在櫻花脫水機中經過梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟浸泡、常規包埋。共制作蠟塊 530 塊,其中甲狀腺組織 174 塊,肝組織 105 塊,腦組織 43 塊,淋巴結組織 208 塊。
1. 2. 2 蠟塊切片及標本分組 530 塊蠟塊均使用同一臺切片機,切片厚度 3 μm; 每一蠟塊切片 2 次,第 1 次切片時采用加濕套裝進行加濕處理,該組切片為加濕組; 第 2 次切片時不作任何處理,該組切片為對照組。整個操作過程中,均由經驗豐富的同一技師操作。
1. 2. 3 加濕器組 加濕器組在切片同時,采用超聲波加濕器配合切片機加濕套裝在切片過程中從始至終對蠟塊進行加濕; 而對照組直接切片。
1. 2. 4 切片機加濕套裝制作及使用方法 將塑料載玻片盒蓋較短的一側去掉( 圖 1) ,將塑料軟管的一頭插入加濕器出氣孔中,另一頭放置在切片機刀頭的正上方( 圖 2) ,將制作好的盒蓋覆蓋在軟管頭上( 圖 3) ,在 23 ~ 25℃的室溫下,加滿加濕器水箱,打開開關,調節加濕器噴霧量旋鈕使加濕器噴出的水霧完全覆蓋所要切的蠟塊,即可進行切片( 圖 4) .
1. 3 結果判定 參照 HE 切片的規范技術標準[3]判定為合格。①切片組織完整; ②切片薄厚均勻; ③切片染色對比清晰,紅、藍分明; ④切片無刀痕、無裂隙、無顫痕; ⑤切片平坦、無皺褶、無折疊; ⑥切片無污染; ⑦切片封膠適中,無氣泡、透明度好; ⑧切片無松散,裱貼位置適當; ⑨切片整潔,標簽端正牢固; \ue583瑏瑠切片編號清楚,掃描準確。
2 結果
共切片 1060 片,其中加濕器組耗時 177 min,對照組耗時 243 min,制片時間較對照組減少 27. 1%; 加濕器組干燥、碎裂現象較對照組大幅減少( 79. 1%) .加濕器組共有 62 張蠟片出現干燥、碎裂( 11. 7%) ,其中甲狀腺組織 20 片,肝組織 11 片,腦組織 6 片,淋巴結組織 25 片; 對照組有 297 張蠟片出現干燥、碎裂( 56%) ,其中甲狀腺組織 97 片,肝組織 59片,腦組織 24 片,淋巴結組織 117 片。加濕器組 62 張出現碎裂的蠟片中,58 張在對照組中全部出現干燥碎裂,僅有 4張未出現; 對照組中出現干燥、碎裂的蠟片 239 張。由此可見,經過加濕器加濕后,甲狀腺組織、肝組織、腦組織、淋巴結組織出現干燥碎裂的情況大大減少,切片平整,結構完好,各種組織的情況較對照組的有明顯改善( 圖 5,6) .
3 討論
由于取材組織大小不等、組織來源各異、各自含水量和脂質成分不一,又經過相同的脫水、浸蠟后組織性狀發生改變,導致切片干燥、碎裂。在脫水過程中,一些含水分較多的組織( 如大腦、甲狀腺、淋巴結、肝等) 由于水分被置換出去制成的蠟塊發干,易導致切片干燥、碎裂,這就影響了切片的質量,給病理診斷造成困難[4].我科技術人員通過反復試驗,自 2013 年使用自制的加濕裝置以來,使工作效率和切片質量都得到了大幅度提升。本研究結果顯示,加濕器組出現干燥、碎裂的蠟片數量較對照組明顯減少,同時耗時減少27. 1% ,在大規模應用時可有效減少工作時間,對于提升切片質量及縮短切片時間方面作用明顯。此外,加濕組僅有11. 7% 的切片出現干燥碎裂現象,而對照組有 56% 的切片出現干燥、碎裂現象,可見加濕器組明顯改善了切片質量。
本組實驗中,共有 58 個蠟塊在兩組中均出現干燥碎裂現象,推測原因: ①細胞內含水分比例較大的組織。經過同時脫水水分丟失過多,導致蠟片干燥、碎裂; 對此種情況可以通過加大加濕器的噴霧量來盡量減少脫水,但很難杜絕。②少部分腫瘤含膠原成分過多或鈣鹽沉積較為嚴重導致切片干燥、碎裂,這種情況通過勤換刀片和對鈣鹽沉積組織進行脫鈣處理。而僅在加濕器組出現干燥碎裂的 4 個蠟塊,考慮可能原因為切片例數較多,導致刀片變鈍引起。而僅在對照組出現干燥、碎裂的蠟片為 239 張,主要原因為濕度不夠,由于脫水過程中組織內的水分大部分被置換出去,導致組織內含水量不足、不均所致。
我科自使用加濕器及切片加濕套裝后,積累了一些使用經驗: ①超聲波加濕器在使用中,應盡量采用蒸餾水,以避免水垢影響切片機的壽命,也給保養帶來困難。②在一段時間不使用加濕器時,應注意更換水箱中的陳水,將水箱及水槽清洗干凈。③超聲波加濕器有風動裝置,具備進風口和出風口,長時間使用進風口處也會有塵埃堵塞,引起進風不暢,直接影響水霧擴散,應定時清理機器風口。④使用加濕器時應調節至合適的霧化量,過于潮濕會使切片機金屬部件生銹,縮短切片機的壽命。⑤由于切片加濕套裝的塑料軟管較長,會有凝結的蒸餾水滯留在軟管內,導致軟管堵塞,故應經常傾倒軟管內凝結的蒸餾水。
參考文獻:
[1] 朱莉艷。 石蠟切片龜裂的原因分析[J]. 浙江中西醫結合雜志,2008,18( 10) : 634 -635.
[2] 付先利,吳建農。 一種解決切片干燥的方法[J]. 臨床與實驗病理學雜志,2013,29( 7) : 807.
[3] 王德田,董建強。 實用現代病理學技術[M]. 北京: 中國協和醫科大學出版社,2012. 76.
[4] 王伯沄,李玉松,黃高升,等。 病理學技術[M]. 北京: 人民衛生出版社,2000: 75 -76.