蘇木精染液的染色力是影響 HE 染色成功的關鍵因素之一，而染色力隨染色時間和切片數量的增加呈進行性下降。實際工作中技術人員大多依據個人經驗來決定蘇木精染液是否需要更換，缺乏統一標準，造成批間差異大。本文通過測定蘇木精染液使用過程中 pH 值的變化來確定染液的酸度值，評價蘇木精染液的染色力，為實際工作中蘇木精染液的更換提供量化參考指標，從而更好地開展 HE 染色的質量控制。

1 材料與方法

1. 1 蘇木精染液的配制 采用常規使用的改良 Lillie-Mayer蘇木精染液，具體配制方法如下[1]: 蘇木精 5 g 溶于 50 ml 無水乙醇，50 g 硫酸鋁鉀充分溶于 650 ml 蒸餾水后與蘇木精無水乙醇液充分混合，加入 500 mg 碘酸鈉，最后加入甘油300 ml和冰醋酸 20 ml,室溫靜置 1 周后備用。

1. 2 儀器 實驗所用染色機為 Leica AutostainerXL,pH 值測定計為 sartorius PB -10.

1. 3 方法 隨機挑選胃、腸、肺、淋巴結、乳腺、肝等組織蠟塊，共 10 塊，每個蠟塊連切 18 張切片備用； 用新蘇木精染液行常規 HE 染色，分別選取第 0、500、1000、1500、2000、2500張切片時測量染液的 pH 值，每一時間點同步選取實驗備用片進行染色，并更換新的分化液和藍化液； 更換蘇木精染液后重復本實驗 2 次。每批次所染切片均由 2 名高年資病理醫師與一名技術主管同時對所染切片進行評價，每張切片 3者評價結果必須一致，評價結果不一致的切片均算不合格片，每一批 10 張切片中有 4 張切片染色評價不合格即可確定染液的染色力不夠需更換。

2 結果

2. 1 pH 值與染色切片數量的關系 3 次實驗中，隨著染色切片數量的增加，染液的 pH 值也在逐步升高。3 次實驗中同一時間點染液 pH 值的均值與染色切片數量的關系見表1.

2. 2 pH 值與蘇木精染液染色力的關系 不同批次的實驗結果顯示，蘇木精染液染色力在染液 pH 值 1. 51 ~1. 87 間變化小，隨著染色切片數的增加，染液 pH 值逐漸升高，而染色力不斷下降； 第 2、3 次實驗中，染液累積染色切片至 2500,pH 值分別達到 2. 65 和 2. 71 時，染色合格片分別只有 6 和 4張（ 表 2） .

3 討論

蘇木精 - 伊紅（ HE） 染色是組織與細胞學最常用的染色方法之一，蘇木精染液的染色力是影響 HE 染色成功的關鍵因素。蘇木精染液的染色力主要受蘇木精的氧化狀態影響，氧化不足或過度氧化均可影響其染色力。各類蘇木精染液配制方法的區別主要在氧化方法的選擇及氧化劑用量上。蘇木精染液配制過程中加入醋酸主要是調節染液 pH 值，當pH 值處于合適范圍時，不僅可以抵消氧化劑的過度氧化、促進氧化蘇木精（ 即蘇木紅） 與鋁鹽結合形成藍色色淀、還可維持細胞核呈酸式電離，增強細胞核的選擇性著色，減少蘇木精沉渣與氧化膜的形成[1].不同方法配制的蘇木精染液初始 pH 值可能不盡相同，但確保蘇木精染液的酸性環境和穩定染液的 pH 值對蘇木精染液的染色力尤為重要。蘇木精染液染色力隨切片數量的增加呈漸進式下降，其可能的原因： ①染液染色過程中蘇木精不斷氧化； ②現行 HE 染色不論是手工還是儀器，大多采用浸染式染色方法，切片脫蠟至水化進入蘇木精染液前不可避免地帶入一些自來水，隨著染液的累積使用，使染液的 pH 值逐漸升高，染液的顏色和染色力隨之也不斷變化[2].為了盡可能減少由于染液的累積使用而導致染液 pH 值升高，有研究者在切片進入蘇木精染液前先用 2%冰醋酸水溶液或 10%檸檬酸水處理，以避免切片水洗后帶入自來水，很好地穩定了染液的 pH 值，延長了蘇木精染液的使用時間[3].本研究 3 次重復試驗結果顯示：隨蘇木精染液的累積使用染液 pH 值不斷升高； 染液 pH 值維持在一定范圍內時染液的染色力穩定，pH 值超出范圍后染色力即明顯下降，說明需要更換染液。

參考文獻：

[1] 彭 霞。 不同配方蘇木精染液染色效果觀察[J]. 診斷病理學雜志，2009,01: 66.

[2] 鄭明軍，馬華玲。 冰醋酸在蘇木精和伊紅染色中的不同作用[J]. 診斷病理學雜志，2013,01: 60.

[3] 鄭明軍。 組織細胞成分和染液 pH 值對蘇木精-伊紅染色的影響[J]. 實用醫技雜志，2013,20（ 6） : 668.