微波輻射能使液體中極性分子高頻振動，增加液體分子間的碰撞，從而使液體內部迅速產熱和某些化學反應加快。許多作者利用此原理進行了微波輻射固定組織、微波輻射結合固定液固定組織[1-2]等，均取得良好的效果，但還沒發現用微波輻射結合固定液固定心肌或用微波輻射結合染液染心肌具體方法的報道，為了拓展微波在組織切片的應用，進一步探討微波輻射在 PTAH 法染心肌中的作用和應用的具體方法，本文具體介紹微波輻射分別結合固定液和染液在 PTAH 法染心肌細胞的過程中對材料進行固定和染色的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

取雞心 （ 大小為 1 cm×0.5 cm×0.5 cm） 作為實驗材料，硝酸酒精固定液[3],蘇木精染液，海爾牌 H-R7751MS 型家用微波爐（750W,分 6 檔）為微波輻射儀器。

1.2 方法

1.2.1 取材與固定 將材料分為 6 個對照組，6 個實驗組。對照 1組固定 24 h,對照 2 組固定 30 min,對照 3 組固定 24 h,對照 4組固定 24 h,對照 5 組固定 24 h,對照 6 組固定 24 h ;實驗 1 組固定 30 min →微波 3 min,實驗 2 組固定 1 h →微波 3 min,實驗3 組固定 24 h,實驗 4 組，固定 24 h,實驗 5 組固定 24 h,實驗 6組固定 24 h.

1.2.2 漂洗 70% 酒精 4 h → 50% 酒精 4 h →水洗 4 h 以上。

1.2.3 染色 對照1組浸染10 d,對照2組浸染10 d,對照3組浸染5 h,對照 4 組浸染 1 d,對照 5 組浸染 2 d,對照 6 組浸染 3 d ;實驗 1組浸染10 d,實驗2組浸染10 d,實驗3組浸染5 h→微波達5 mi（n低于 45℃），實驗 4 組浸染 1 d →微波達 5 min（低于 45℃），實驗 5組浸染 2d →微波達 5 min（低于 45℃），實驗 6 組浸染 3d →微波達 5 min（低于 45℃）。微波輻射的檔次是根據微波輻射時間和最高溫度設計并預先測試后而選定的。微波輻射方法同固定。對照3、4、5、6 組分別染色 5 h、1 d、2 d、3 d,實驗 3、4、5、6 組分別染色 5 h、1 d、2 d、3 d 后加低檔微波 5 min（溫度低于 45℃）。

1.2.4 水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋 流水沖洗 24 h,各級酒精脫水。常規透明與浸蠟，石蠟包埋。

1.2.5 切片、貼片、烤片、脫蠟、封片 切片的厚度為 6 ?m,浮漂法貼片，二甲苯中脫蠟，中性樹膠封片。

2 結果

2.1 對照組結果

對照 1 組組織染色深，細胞結構完好，閏盤和環紋不清楚。

對照 2 組組織染色深，細胞有收縮嚴重。對照 3 組組織染色淺且不均勻。細胞的各部分結構模糊不清。對照 4、5、6 組組織染色淺但較為均勻，在目鏡為10倍物鏡為40時可以清楚的看到細胞核、核仁，無閏盤，環紋不清楚。

2.2 實驗組結果

實驗 1、2 組細胞結構完整無損傷和收縮，閏盤清楚，環紋不清楚，實驗 2 組結果比實驗 1 組更理想。實驗 3、4、5、6 組組織染色較深且比較均勻，細胞結構完整，無損傷和收縮，細胞核與細胞質的分化十分明顯，在目鏡為 10 倍物鏡為 40時可以清楚的看到細胞核、核仁等結構，但實驗 3、4 組看不到閏盤，實驗 5、6 組可以清楚的看見閏盤，以實驗 5 組效果最佳。

3 討論

本實驗結果顯示染色不足的對照組無閏盤 , 環紋不清楚，而用相同時間進行染色然后用一定強度的微波進行處理的實驗組不僅環紋清楚，有的閏盤也比較清楚，這說明微波對組織的染色具有促進作用，即在 PTAH 法染心肌細胞中利用微波結合硝酸酒精固定液固定心肌細胞效果良好 , 節省時間；在 PTAH法染心肌細胞中利用微波結合蘇木精染液染心肌細胞效果良好，節省時間。

參考文獻：
[1] Loqin GR,Leonard JB,Dvorak AM. Calibration andstandardization of microwave ovens for fixation of brain and peripheralnerve tissue[J]. Methods,1998,15（2） :107-117.
[2] 楚德昌 . 微波在 Cajal 染色中的應用 [J]. 生物學雜志，2003,20（2） :35-36.
[3] 杜卓民 . 實用組織學技術 [M]. 北京 :人民衛生出版社，1998 :136-137.