病理組織切片技術在病理實驗室中是較為基本的一種方法,在臨床外科病理中是最為基本的一種形態學檢驗技術[1].病理組織切片制作質量是否符合標準,對于病理診斷準確性具有一定影響。本文選取病理切片壞片512件,分析其相關因素及處理對策,現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取我院 2012 年 1 月~ 2014 年 3 月病理切片壞片 512 件。
1.2 方法
統計分析在病理切片制作過程中出現壞片環節及引發此情況發生的相關原因,并總結其相應對策。
2 結果
在本文所選取的 512 例壞片病理切片中,包埋切片、標本固定、染色固封三個過程造成的壞片比例較高,其所占比率分別為 34.18%(175/512)、21.48%(110/512)、19.53%(100/512);其次為取材與添加試劑試藥,分別占 14.26%(73/512)、10.55%(54/512);造成壞片主要原因為操作不當 306 例(59.77%),試劑試藥 54 例(10.55%),器械原因 143 例(27.93%),環境原因 9 例(1.76%)。
3 討論
3.1 組織標本固定
當臨床醫生獲得病理標本后,需及時將標本放置到有充足固定液的容器中,固定液量通常為標本體積的 4 ~ 5 倍,也可在15 ~ 20 倍范圍[2].大標本或存在包膜標本需切開固定,在切開時間距保持 1 cm 左右,且注意不將其完全斷開,需保留標本原本形狀。所用固定時間需根據標本大小進行確定,小標本通常需≥ 4 h,大標本通?!?8 h,盡量避免出現固定未及時或無充分性的情況發生,造成標本干涸或腐敗情況導致無法順利制片。
3.2 標本取材規范化
將標本完全固定后進行取材。取材過程需盡可能去掉多余或無相關性組織,切面需保持平整性。小標本通常全部進行制片,大標本則需在病變位置、病變與正常組織交界位置多處進行取材。
取得的組織塊需注意形狀具有規則性,大小合理,薄厚保持一致性,通常為 1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm[3].有的組織在取材時則具有較高靈活性,組織質硬韌時則取薄一些,組織具有一定疏松性時則適當取厚,當全喉切除時則制作大切片。在對骨組織進行取材時則需經充分脫鈣后實施,以大頭針輕扎骨組織能夠穿入則可。在取材過程中避免用力擠壓,防止組織因受壓而出現變形情況。
3.3 及時更換試劑
切片過程若試劑濃度出現變化,則往往對組織脫水、透明、浸蠟效果造成一定影響,有的試劑由于揮發而混至其他試劑中,甚至使得病理組織受到一定污染,由此出現誤診現象。所以在制片過程中需觀察試劑變化,按照標本量大小立即更換試劑,保證組織處理具有合理性。
3.4 嚴格執行包埋及切片操作
對于碎小組織需包埋到同一個平面上,在包埋時經熱鑷子處理使得預制好蠟塊表面進行熔化,從而使得碎組織完全包埋到同一平面,在表面發生初凝時,及時以平滑金屬板對其進行片刻輕壓。小塊組織需進行線狀包埋,大塊組織則需在包埋時進行壓平處理。對于囊壁、管壁組織或操作突起組織需及時進行包埋或沿突起縱切面進行包埋,注意觀察各個層次。在進行切片前需確保刀具有鋒利性,避免切片出現斷裂、破碎情況[4].蠟塊切片機需進行良好固定,避免對切片刀及組織塊造成損傷。切片確保完整性,需將每塊組織完全切出,且需切至最大面,避免出現漏診情況。蠟片出現彎曲極有可能因刀鋒不均勻,切片刀并未磨直,切片刀與蠟塊無平行性。切片發生裂痕極有可能是切片刀存在缺口,石蠟中出現雜質,組織中存在鈣化、骨片或線結,或是棉紙纖維等。當切片存在不連片現象,切不下片,切片較厚或切片后蠟塊呈現白色,內陷組織無良好脫水,一般需將蠟塊進行溶解,取出組織,置入加熱水浴的丙酮內(80℃),持續 30 ~ 60 min,然后予以透明浸蠟包埋切片。
3.5 合理染色封固
注意把握烤片條件,通常 60℃烤片持續 0.5 ~ 1 h;加強對脫蠟的重視,避免因脫蠟不干凈而對著色造成影響;且應加強對鹽酸乙醇分化的重視避免因分化效果不佳而導致染色失敗[5].且樹膠稠度需保持適度,避免溢膠或封片不完全、空泡現象發生。將切片固封后,需立即貼標簽,避免發生混淆情況。
參考文獻:
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[5] 辛英,朱兆霞,胡麗,等 . 土豆片外敷在抽血外滲中的應用 [J].中國療養醫學,2013,22(4):350-351.