金品腫痛系列藥物為云南省藥物研究所自主研發的特色外用系列藥物,同時也為云南彝醫傳統用藥,是云南省藥物研究所依據彝族秘方經科學驗證后開發,研制而成的民族藥.現該制劑存在多種劑型,為比較各類劑型的優劣性,指導臨床用藥,對金品腫痛系列藥物不同劑型,不同給藥方式的體外透過情況進行研究.由于金品腫痛系列藥物主要為外用制劑,使用過程中主要給藥途徑為經皮給藥,因而皮膚的屏障作用是決定藥物滲透速度的關鍵,藥物的透皮能力對藥物的吸收有直接影響.
金品腫痛系列藥物由近 20 種中藥組成,消腫止痛,活血化瘀,舒經活絡,化痞散結.主要用于跌打損傷,風濕關節炎,肩周炎,痛風關節炎,乳腺小葉增生.其中所含梔子苷具有鎮痛、抗炎、治療軟組織損傷等作用.梔子苷結構簡單,穩定性好,相對質量分數高,出峰峰形好,利于計算.因此,選梔子苷作為指標成分.
1 儀器與試藥
1. 1 儀器
RYJ - 6A 型藥物頭皮擴散試驗儀\\( 上海黃海藥檢儀器廠\\) ; PL203 電子精密天平\\( 上海梅特勒 - 托利多儀器有限公司\\) ; 電熱恒溫水浴鍋\\( 北京市光明醫療儀器廠\\) ; 高效液相儀\\( Agilent1200,美國\\) ; 超聲儀\\( HS6150D\\) .
1.2試藥
金品腫痛搽劑\\(云南省藥物研究所自制\\);金品腫痛氣霧劑\\(云南省藥物研究所自制\\);桅子有對照品\\(批號:110703 - 200322,規格:20 mg\\) ;甲醇\\(色譜純\\);無水乙醇\\( 分析純\\) ; 氯化鈉\\( 分析純; 上海國藥集團\\) ; 乙腈\\( 色譜純\\) ; 蒸餾水為重蒸水.
1. 3 動物
昆醫種雄性小鼠
2 實驗方法
2. 1 離體皮膚處理
昆明種雄性小鼠斷頸處死后,用剪刀小心剪去小鼠腹部的絨毛后,用剃須刀刮凈,注意不能弄破皮膚.迅速剝離小鼠腹部皮膚,清理殘余的皮下組織和脂肪,侵入生理鹽水中,備用.
2. 2 體外透皮試驗條件
本文中涉及到的體外透皮試驗裝置為改良的 Franz 擴散池; 水浴溫度為\\( 31 ±0. 1\\) ℃; 接收液為 30% 乙醇生理鹽水; 接收池體積為 7 mL; 釋放面積為 10. 747 cm2.
2. 3 體外透皮試驗方法
取 6 個 Franz 擴散池,標注為 1、2、3、4、5、6 號,分別覆于經處理的雄性小鼠皮膚,在擴散池內注入接收液并充滿,第 1 組實驗分別在 1 -6 號皮膚角質層側定量注入 2 mL 腫痛搽劑,第二組實驗分別在 1 ~6 號皮膚角質層側定量噴入2 mL 腫痛氣霧劑,第 3 組實驗分別在 1 - 6 號皮膚角質層側定量注入 2 mL 腫痛氣霧劑.向上排出氣泡后置水浴中加熱并計時,分別于 1、2、4、6、12、24、48、72 h 取樣,全部取出接收液,每次取樣后重新注滿接收液,并排除擴散池中的氣泡.將 1、2、4、6、12、24、48、72 h 取樣的接收液置于置于蒸發皿中,60 ℃水浴蒸干,1、2 h 樣品甲醇定容至 1 mL,制成供試品溶液;4、6、12 h 樣品甲醇定容至 2 mL,制成供試品溶液;24、48、72 h 樣品甲醇定容至5 mL,制成供試品溶液.
2. 4 接收液中梔子苷的 HPLC 測定方法.
2. 4. 1 色譜條件 色譜柱 Phenomenex\\( 4. 6 mm × 250 mm,5 μm\\) ,流動相為乙腈 - 水\\( 15 ∶ 85\\) ; 流速 1 mL / min; 檢測波長 238 nm; 柱溫 30 ℃.進樣量: 10 μL,運行時間為 25min,甲醇為空白對照.此條件下梔子苷能很好分離,見圖1 ~ 3.
2. 4. 2 標準曲線的制備 精密稱取干燥后的梔子苷對照品 12. 5 mg 于容量瓶中,加甲醇定容到 50 mL,制成對照品溶液.分別精密量取 0. 2、0. 5、0. 7、1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0 mL 置于 10 mL 容量瓶中,加甲醇定容.0. 45 μm 濾膜過濾,按 2. 4. 1 項下色譜條件測定,記錄峰面積.以濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程為: Y= 15. 354X + 1. 6115 \\( R2= 0. 9999 \\) ,線性范圍 0. 05 ~2. 5 mg.
2. 4. 3 精密度試驗 ①日內精密度試驗: 取標準曲線項下標準品溶液,按上述色譜條件重復進樣 6 次,測定梔子苷峰面積,RSD 值為 0. 15%.②日間精密度試驗: 取標準曲線項下標準品溶液,按上述色譜條件每日重復進樣 3 次,連續3 d.測定梔子苷峰面積,RSD 值為 1. 65% .
2. 4. 4 重復性試驗 取同一時間點的接收液 6 份,分別置于蒸發皿中,60 ℃ 水浴蒸干,甲醇定容至 5 mL.經 0. 45μm 濾膜過濾,按上述色譜條件,測定梔子苷峰面積,RSD值為 1. 11%.
2. 4. 5 穩定性試驗 取同一份體外經皮滲透液,于蒸發皿中,60 ℃水浴蒸干,甲醇定容至 10 mL,分別放置 0 h、2 h、4h、6 h、24 h、72 h 定量進樣,測定梔子總皂苷峰面積,RSD值為 1. 47%.
2. 4. 6 加樣回收率試驗 將同一時間點的 9 份接收液,分別加入高、中、低 3 個濃度的梔子苷對照品溶液,分別置于 60 ℃水浴蒸干,甲醇定容至.按上述色譜條件,測定梔子苷峰面積.計算回收率,高、中、低3 個濃度的回收率分別為100.93%,98.60%,100.19%,平均回收率為99. 91%.
3 結 果
3. 1 金品腫痛搽劑\\( 涂搽給藥\\) 的累積透過曲線測定
將上述第1 組實驗結果,1 ~72 h 的1 ~6 號各接收液按要求制成供試品,經上述色譜條件測定.根據計算各時間點的累積透過量,繪制體外經皮滲透曲線圖,結果見表1.
以 t0. 5為橫坐標,以 Q 為縱坐標,繪制累積透過曲線,進行擬合.結果見圖 4.
3. 2 金品腫痛氣霧劑\\( 噴射給藥\\) 的累積透過曲線測定
將上述第 2 組實驗結果,1 ~72 h 的 1 ~6 號各接收液按要求制成供試品,經上述色譜條件測定.根據計算各時間點的累積透過量,繪制體外經皮滲透曲線圖,結果見表2.
以 t0. 5為橫坐標,以 Q 為縱坐標,繪制累積透過曲線,進行擬合.結果見圖 5.
3. 3 腫痛氣霧劑\\( 涂搽給藥\\) 的累積透過曲線測定將上述第3 組實驗結果,1 ~72 h 的1 ~6 號各接收液按要求制成供試品,經上述色譜條件測定.根據計算各時間點的累積透過量,繪制體外經皮滲透曲線圖,結果見表3.
以 t0. 5為橫坐標,以 Q 為縱坐標,繪制累積透過曲線,進行擬合.結果見圖 6.
4 結 果
金品腫痛搽劑\\( 涂搽給藥\\) 體外 24 h 累積透過量為57. 3082 μg / cm2; 穩態透皮速率\\( J\\) 為 11. 96 μg/cm2; 金品腫痛氣霧劑\\( 噴射給藥\\) 體外 24 h 累積透過量為 52. 1414μg/cm2; 穩態透皮速率\\( J\\) 為 7. 444 μg/cm2; 金品腫痛氣霧劑\\( 涂搽給藥\\) 體外 24h 累積透過量為 38. 1809 μg/cm2; 穩態透皮速率\\( J\\) 為 9. 737 μg/cm2.
5 結 論
由以上結果可知: 金品腫痛氣霧劑采用噴射給藥方式時在 0 ~2 h 有明顯快速釋放過程,隨后釋放趨勢逐漸減緩,至 72 h 釋放量已較微弱.證明金品腫痛氣霧劑是速釋制劑,急性使用時能發揮快速、明顯的藥效.金品腫痛搽劑在 6 ~24 h 釋放量最高,且能在 24 h 有最高的累積透過量\\( 57. 3082 μg/cm2\\) ,適宜作為長效制劑長期給藥.同一制劑采用噴射給藥能使藥物快速經皮滲透,采用涂搽給藥釋藥較均勻平穩,但釋放周期過長\\( 72 h 仍有較高滲透量\\) ,可作為進一步劑型開發的基礎.
6 討 論
金品腫痛系列藥物的體外透皮試驗證明,該系列藥物作為經皮給藥制劑,不經過胃腸道系統,可以避免胃腸道的破壞作用和肝臟的"首過效應",提高藥物的生物利用度,能比較持續穩定的發揮療效,降低不良反應.
臨床使用中,可針對用藥需求對氣霧劑和搽劑進行選擇,能更合理的指導用藥,減少浪費,提高療效.
本文中采用的梔子苷檢測方法為藥典方法,同時也是金品腫痛系列產品質量標準中的梔子苷含量檢測方法,但體外皮膚滲透實驗未用過此方法,經方法學驗證,此檢測條件可用做金品腫痛系列藥物體外透皮實驗接收液的梔子苷檢測.
參考文獻
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