脾臟和淋巴結是成熟 T 細胞定居的場所，定居于此處的 T 細胞接受樹突狀細胞 \\(dendritic cell，DC\\) 、巨噬細胞提呈的抗原后活化、增殖，分化為效應性 T 細胞。脾臟在胚胎期具有造血功能，成年后成為最大的免疫器官，可清除血液中的病原體、衰老細胞及異物等。淋巴結是免疫應答發生的主要場所之一，淋巴結中 T 細胞的比例遠高于脾臟。細胞在免疫器官的不同分布、功能與細胞表面的黏附分子密切相關。CD11b 是一種相對分子質量\\(Mr\\) 為165 000 ～ 170 000 的整合素 α 蛋白，常作為單核巨噬細胞的分化標志。CD11b 與 CD18 以非共價鍵結合形成補體 iC3b 受體\\(complement receptor of iC3b，CR3\\)。CR3 主要表達在巨噬細胞、NK 細胞、粒細胞、活化的淋巴細胞、B-1 細胞和小膠質細胞表面。CR3 可與細胞間黏附分子 1\\(intercellularadhesion molecule 1，ICAM-1 \\) 結合，介導細胞間黏附，炎性細胞的趨化。為闡釋 CD11b 在脾臟和淋巴結的分布差異及其生物學特性，本研究對 CD11b在 C57BL/6 小鼠脾臟和淋巴結細胞的表達及其功能進行初步探討。

1 材料和方法

1． 1 材料 C57BL /6 小鼠，6 ～ 8 周齡，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，小鼠飼養在河南省實驗動物中心 SPF級環境。流式細胞術所用的熒光團標記的大鼠抗小鼠抗體\\(CD3-eFl660、CD4-FITC、CD8-PE、CD8-Percp-Cy5． 5、CD11b-PE、CD11b-eFl660、CD44-PE、CD62L-Percp-Cy5． 5 \\) 及大鼠IgG2b κ 同型對照-PE 購自 eBioscience 公司。

1． 2 方法

1． 2． 1 Freund 完全佐劑皮下免疫 小鼠分為 2 組，免疫組和對照組，每組小鼠5 只以上。Freund 完全佐劑\\(complete Freund'sadjuvant，CFA\\) 含滅活結核分枝桿菌 H37 Ra 5 mg / mL，與磷酸鹽緩沖液以 1∶1 體積混合后徹底乳化，于 C57BL/6 小鼠背部兩側皮下注射乳化劑，總免疫劑量 200μL/只。

1． 2． 2 流式細胞術分析 取小鼠脾臟和淋巴結，制備單個核細胞懸液，計數 1 ×106細胞，按說明要求分別加入熒光團標記的抗體，4℃避光孵育 30 min; PBS 洗滌 2 次，流式細胞儀檢測，分析 CD11b 在脾臟和淋巴結 CD3+和 CD3－細胞的表達; 分別以 CD3+CD4+和 CD3+CD8+細胞設門，分析 CD11b在不同 T 細胞亞群的表達; 先以 CD4+細胞設門，進一步以CD11b+和 CD11b－細胞設門，分析 CD44+CD62L+雙陽性細胞在 CD11b+和 CD11b－細胞中的表達比例; CFA 免疫后，以CD3+CD4+細胞設門，分析 CD11b 在 CD4+T 細胞亞群的表達變化。流式數據用 Cellquest 軟件分析。

1． 2． 3 統計學分析 所有數值以 x ± s 表示，兩組間差異顯著性用 t 檢驗進行分析，P ＜0． 05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2． 1 CD11b 在脾臟和淋巴結細胞中的差異表達CD11b 在脾臟細胞的總體表達\\(19． 9 ± 2． 5\\) % 略高于淋巴結\\(16． 0 ±4． 2\\)%，但 CD11b 在脾臟和淋巴結細胞的分布差異顯著。在淋巴結，CD11b 主要表達在CD3+細胞\\(12． 52 ± 1． 32\\)%，CD3－CD11b+細胞僅占\\(2． 95 ± 0． 83\\)%。在脾臟，CD11b 主要表達于CD3－細胞\\(14． 93 ± 0． 94\\)% ，CD3+CD11 b+細胞僅占\\(4． 16 ±0． 77\\)%\\(圖 1\\)?！?】

2． 2 CD11b 在不同 T 細胞亞群的表達 CD11b 在脾臟和淋巴結 T 細胞中的表達分別為 \\(10． 49 ±1． 71\\) % 和\\( 11． 96 ± 1． 32 \\) % ，差異無統計學意義\\(P = 0． 337\\)。但在脾臟和淋巴結 T 細胞中 CD11b 均主要表達在 CD4+T 細胞，而在 CD8+T 細胞上的表達較少。脾臟和淋巴結 CD4+T 細胞 CD11b 的表達分別 為 \\(18． 70 ± 1． 82\\)% 和 \\(20． 06 ± 1． 12\\)%\\(P =0． 185\\)，CD8+T 細胞 CD11b 的表達分別為\\(2． 29 ±0． 24\\)%和\\(2． 20 ±0． 20\\)%\\(P =0． 693\\)?！?】

2． 3 T 細胞表達 CD11b 與其活化的關系 CD44 和CD62L 常用于評價 CD4+T 細胞的活化狀態。CD4+CD11b+T 細 胞 中 CD44+CD62L+細 胞 占52． 4%，CD4+CD11b－T 細胞中 CD44+CD62L+細胞占10． 6%。提示，高表達 CD11b 的 CD4+T 細胞處于活化狀態\\(圖 3\\)?！?】

2． 4 CFA 免疫誘導 T 細胞高表達 CD11b CFA 可刺激機體局部免疫反應，CFA 背部皮下免疫初始C57BL /6 小鼠，第 3 天獲取集合淋巴結和脾臟細胞。

發現 CFA 免疫后淋巴結 CD4+T 細胞高表達 CD11b，由初始狀態\\(淋巴結\\) 的\\(20． 06 ± 1． 12\\)% 升高至\\(58． 22 ± 3． 41\\)%\\(P ＜ 0． 01\\)。脾臟 CD4+T 細胞CD11b 表 達 輕 微 升 高， 由 初 始 狀 態 \\( 脾 臟 \\) 的\\(18． 70 ±1． 82\\)%升高至\\(25． 42 ± 3． 17\\)%，但兩者差異無統計學意義\\(P =0． 103，圖 4\\)?！?】

3 討論

CD11b 是補體 iC3b 受體\\( CR3\\) 的 α 鏈。通常認為，CD11b 僅表達于巨噬細胞表面，在炎癥反應中介導單核巨噬細胞對靶細胞的調理作用。目前，關于 CD11b 的研究多集中于中性粒細胞、單核巨噬細胞、髓系來源的抑制細胞和自然殺傷細胞。

CD11b 在 T 細胞上的表達研究較少，在小鼠 CD4+T細胞上的表達尚未見報道。Wagner 等報道，人外周血 T 細胞可少量表達 CD11b，CD11b 主要表達于CD8+T 細 胞， CD4+T 細 胞 活 化 后 也 可 表 達。

Ichikawa 等以 CD11c+細胞設門，發現小鼠脾臟細胞中存在一群 CD4+CD11b+細胞，并將其命名為CD4+DC。Koo 等在骨性關節炎和風濕性關節炎患者的關節滑膜液中發現大量 CD4+CD11b+細胞，并認為該群細胞為單核細胞。CD11b 在脾臟和淋巴結細胞的分布、在 T 細胞亞群的差異表達目前仍不清楚。本研究發現，CD11b 在脾臟主要表達于單核巨噬細胞，但在淋巴結主要表達于 T 細胞。脾臟大量存在的單核巨噬細胞與其清除衰老、凋亡細胞及異物有關。CD11b 可表達于脾臟和淋巴結 T 細胞，且主要表達于 CD4+T 細胞，CD8+T 細胞幾乎不表達。CD11b 在小鼠 T 細胞亞群的表達與在人 T 細胞亞群的表達正好相反。如上所述，CD4+CD11b+細胞曾被作為 CD4+DC、單核細胞進行研究。本研究以 CD3+細胞設門，分析 CD11b 在 CD4+和 CD8+細胞中的表達，因此可以認為該群細胞為 T 細胞。

CD11b 在小鼠 CD4+T 細胞上的表達尚未見報道。

CD11b 是參與 炎癥反應的重要黏附分子，CD11b / CD18 與其配體 ICAM-1 的相互作用對于中性粒細胞與血管內皮細胞的黏附，及其隨后穿越血管內皮細胞發揮重要作用。相對于 CD4+CD11b－細胞，CD4+CD11b+細胞高表達 CD44 和 CD62L。

CD44 和 CD62L 是 T 細胞活化的標志分子。提示，CD4+CD11b+細胞為一群活化的 T 細胞。CD11b 可能作為黏附分子參與 T 細胞活化后的細胞遷移。

CFA 免疫后，集合淋巴結 CD4+T 細胞 CD11b 表達升高，脾臟 CD4+T 細胞 CD11b 表達輕微升高。本實驗進一步印證 CD4+T 細胞 CD11b 的表達與細胞活化有關。Wagner 等報道，CD11b 僅在靜止的人外周血 T 細胞表面少量表達，細胞活化后高表達 CD11b。

我們的研究結果與文獻報道一致。

綜上所述，CD11b 不僅表達于單核巨噬細胞，還可表達于 CD4+T 細胞，但幾乎不表達于 CD8+T 細胞。CD11b 在 T 細胞亞群的差異表達與其功能有關。

CD4+CD11b+T 細胞為活化細胞，CD11b 為 CD4+T細胞的活化標志，可能作為黏附分子參與細胞活化后的遷移。研究生理和病理狀態下 CD11b 的表達變化，調節 CD11b 的表達水平對某些疾病可能有潛在的治療價值。