在免疫組織化學染色中，部分抗原的修復要通過EDTA抗原修復液煮沸法進行。筆者采用不同修復時間的高壓法通過EDTA抗原修復液對抗原進行修復，并 與 煮 沸 法 的 修 復 效 果 進 行 對 比，旨 在 探 討EDTA抗原修復液合適修復時間的高壓法在免疫組化中的應用價值。
1材料與方法
1.1標本來源本組標本取自2013年6月至2014年4月貴州航天醫院收治的腫瘤患者20例，其中肺癌11例、前列腺癌3例、胃間質瘤2例、淋巴瘤2例、間皮瘤1例、子宮內膜間質肉瘤1例、乳腺癌1例；標本均經10%中性福爾馬林固定，常規脫水、石蠟包埋，切片厚為4μm,且均經病理證實為抗原表達陽性的腫瘤標本。
1.2試劑和儀器
（1）試劑：包括TTF-1、CK5/6、P504S、CD117、CD2、Bcl-6、CR、CD10、CD31、CEA共10種 常 用 抗 體；EDTA抗 原 修 復 液 （0.01M,pH9.0）；PBS緩沖液（0.01M,PH7.4）；即用型快捷免疫組化MaxvisionTM試劑盒。（2）儀器：包括烤箱、電熱高壓鍋、培養箱等。
1.3修復方法
（1）高壓法：取EDTA抗原修復液1500ml放入電熱高壓鍋中加熱至沸騰后，將放置在耐高溫塑料架上的切片放入EDTA抗原修復液中，擰緊鍋蓋繼續加熱至噴氣，扣上壓力閥，分別于加熱2、5、7min后打開排氣閥，待EDTA抗原修復液冷卻至室溫取出切片備用。（2）煮沸法：取EDTA抗原修復液1500ml放入高壓鍋中加熱至沸騰后，將切片放入EDTA抗原修復液中，蓋上鍋蓋（鍋蓋不擰緊、亦不扣壓力閥）繼續加熱20min,待EDTA抗原修復液冷卻至室溫取出切片備用。
1.4免疫組化染色及結果判定
免疫組化染色步驟參照試劑盒操作說明進行，用PBS代替一抗作為陰性對照，每種抗體均用即用型抗體濃度進行實驗。由2位病理醫師采用雙盲法對標本染色結果進行評價，標本細胞呈深棕黃色者為強陽性（+++）、呈淺棕黃色為弱陽性 （+）、介于二者之間者為陽性（++），無著色者為陰性（-）；陽性細胞≥50%為Ⅲ級、<5%為I級、介于二者之間為Ⅱ級。免疫組化染色結果以“染色強度/陽性細胞級別”的形式表示。
2結果
在EDTA抗原修復液高壓法中，隨著高壓修復時間的增加，標本細胞染色強度和陽性細胞級別逐漸增加；當高壓修復時間超過7min后，其染色效果與煮沸法相當。見表1.
3討論
外檢標本若采用10%中性福爾馬林固定，?？蓪е陆M織中蛋白質分子內或分子間形成醛鍵，使部分蛋白抗原決定簇被隱藏起來，造成某些蛋白表達減弱或不表達、免疫組化染色效果欠佳?？乖迯驼轻槍@一現象進行的補救措施，其通過物理和（或）化學方法，不同程度地恢復抗原的原有空間結構，使被隱藏的抗原決定簇重新暴露出來，以達到理想的標記染色效果?？乖迯偷姆椒ㄝ^多，正確選擇抗原修復方法是決定染色成敗的主要因素之一[1].現已證實，高壓法抗原修復因有封閉穩定的環境，能暴露出更多的抗原決定簇；但采用何種修復液還存在分歧，而且更多的實驗人員主張采用堿性修復液[2,3].本實驗應用高pH值（9.0）堿性EDTA修復液并通過高壓法對抗原進行修復，實驗結果顯示，隨著高壓修復時間的增加，標本細胞著色程度逐漸增強、陽性細胞數逐漸增多，且到一定時間后能達到與煮沸法相當的修復效果，說明選擇EDTA高壓法對抗原進行修復是可行的、理想的，值得推廣，其與王映梅等[4]研究的高壓抗原修復直接法并應用EDTA抗原修復液對組織切片進行抗原修復的效果更好的結論相符合。
在EDTA抗原修復高壓法中，加熱到2min時，多數抗體不著色或色淡；加熱到5min時，修復效果逐漸明顯；加熱到7min時，染色效果幾乎與加熱20min的煮沸法一致。因此筆者認為，EDTA抗原修復高壓法的加熱時間選擇為7min修復效果較好，可以代替煮沸法使用，并可減少一半以上的操作時間；若采用間接法修復，則還可以與檸檬酸抗原修復液在一個高壓鍋內同時進行，能夠更節約操作時間。但由于高溫高壓和堿性溶液的作用，掉片幾率會有所增加，故操作中除應保證薄切片和足夠烤片時間外，徹底清潔處理玻片也很重要，若用經過系列處理的廠家專用免疫組化染色玻片效果更好。
EDTA化 學 名 為 乙 二 胺 四 乙 酸，分 子 式 為C10H16N2O8,分子量292.24,易溶于堿性溶液，是一種螯合劑，可消 除福 爾馬林固 定 產 生 的 不 利 因素[3],其在抗原修復中有肯定的作用，但詳細的作用機制還需要深入研究。由于EDTA抗原修復液的pH值作用大于其所含有的化學成分，其在抗原修復中起至關重要的作用，因此，配制EDTA修復液時必須保證pH值準確在9.0,最好用電子pH計測定以確保準確性。
pH過低或過高可用0.1M Na（OH）2或0.1M HCI調節，每次用后更換新溶液，以保證染色質量。
總之，目前尚無一種抗原修復方法和修復液能適合各種抗體，故實踐中需要不斷探尋適宜抗原修復方法和修復液；但無論采用何種修復方法都應以準確的實驗結果為最佳選擇?？乖迯偷难芯窟€需要更多、更細致的實踐經驗積累。
參考文獻：
[1]羅煥超，余琦，楊江輝，等.不同冷卻方法對免疫組化檢測結果的影響[J].標記免疫分析與臨床，2009,16（4）:259.
[2]袁士成，張鋆歆，陳妹瓊，等.探索細胞免疫組化染色抗原修復方法的合理選擇[J].診斷病理學雜志，2011,18（6）:472-473.
[3]廖德貴，黃世章.不同的抗原修復方法對免疫組化染色結果的影響[J].臨床醫學工程，2009,16（3）:62-63.
[4]王映梅，李培峰，劉一雄，等.高壓抗原修復方法在免疫組化染色的應用比較[J].細胞與分子免疫學雜志，2012,28（1）:1098-1099.
